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Biocoll細(xì)胞分離液正確分離方法和操作時(shí)的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-05-23  |  點(diǎn)擊率:984
  Biocoll細(xì)胞分離液是最早由德國(guó)Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細(xì)胞外,更常用于胰島細(xì)胞的分離。胰島細(xì)胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法,可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細(xì)胞不足及功能低下的問(wèn)題。
  Biocoll細(xì)胞分離液分離方法會(huì)影響胰島的產(chǎn)率和存活率:
  因此,取材時(shí)需要注意
  1.胰臟應(yīng)快速取材,保持包膜完整。
  2.對(duì)胰臟進(jìn)行評(píng)估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
  3.消化過(guò)程不宜進(jìn)行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
  4.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過(guò)頭,否則會(huì)影響胰島純化的產(chǎn)率。
  Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意:
  1.取全血,使用等量PBS稀釋。(全血:HBSS=1:1)
  2.取離心管,加入與血稀釋液等量的PBS于管底,將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。(小心不要使兩種溶液混合,吸頭接近液面,貼壁緩慢加入,尤其是兩種溶液剛接觸到的時(shí)候,一定要慢!慢!再慢?。?/div>
  3.離心:800g,30min,需要將制動(dòng)降至低,即離心機(jī)自然降速至0,離心完畢將得到如圖所示分層(一定要自然降速,或者只有1-2成的制動(dòng))
  4.吸取白膜層至新15mL離心管中。
  5.白膜層液體加10~15mlPBS離心,300g,10min,棄上清。沉淀再加PBS清洗一次,棄上清。
  6.沉淀加入正常培養(yǎng)的*培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),2~3小時(shí),使單核細(xì)胞貼壁。
  7.鏡下觀察細(xì)胞貼壁后,更換培養(yǎng)基,去除未貼壁細(xì)胞,保留下來(lái)的即為所需的單核細(xì)胞。
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