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細(xì)胞培養(yǎng)之支原體檢測(cè)方法~支原體檢測(cè)qPCR

更新時(shí)間:2022-03-15  |  點(diǎn)擊率:1255

在生物制品和細(xì)胞治療領(lǐng)域,支原體檢查是保證產(chǎn)品和治療安全的重要一環(huán)。生物源性原材料、采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)制備的疫苗、抗體,以及細(xì)胞或基因治療產(chǎn)品在生產(chǎn)過(guò)程的不同階段都要進(jìn)行支原體污染的檢查


接下來(lái),本小助將為大家講解各種支原體檢測(cè)的方法比較。


一, 支原體熒光定量PCR,即qPCR.

其原理是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。

它的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度很高,特別是德國(guó)MB的試劑盒,靈敏度可以達(dá)到10CFU/ml以上。

特異性強(qiáng),*涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

操作簡(jiǎn)單,只需配備qPCR儀。

時(shí)間短,2-3小時(shí)可以出結(jié)果。


唯yi的限制,因?yàn)闄z測(cè)的是支原體的DNA,所以無(wú)法區(qū)分活的支原體。但生物制品在生產(chǎn)過(guò)程中,本身不應(yīng)該產(chǎn)生支原體污染,污染過(guò)也不行,所以這個(gè)限制反而變成了優(yōu)點(diǎn)。


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