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Vero細胞無血清培養(yǎng)基的設(shè)計和優(yōu)化

更新時間:2018-12-26  |  點擊率:1575

培養(yǎng)基是影響體外培養(yǎng)細胞生長代謝、增殖乃至生存的直接和重要的環(huán)境因素。Vero細胞無血清培養(yǎng)的技術(shù)關(guān)鍵在于無血清培養(yǎng)基的設(shè)計和優(yōu)化。設(shè)計Vero細胞無血清培養(yǎng)基組成配方的技術(shù)核心是篩選和確定具有促進細胞貼附生長、維持細胞存活、提高病毒擴殖效果的培養(yǎng)基組成成分。

 

 

基于細胞生長和代謝的高通量分析及Plackett-Burman實驗設(shè)計和Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計是Vero細胞無血清培養(yǎng)基設(shè)計和優(yōu)化的主要技術(shù)。Vero細胞的培養(yǎng)需要在適宜的介質(zhì)表面貼附、鋪展才開始有絲分裂、增殖,病毒的有效感染和增殖也有賴于細胞的貼附生長狀態(tài)。

 

此外,在某些病毒疫苗(如流感病毒疫苗)的生產(chǎn)過程中,需要在培養(yǎng)基中加一定濃度的胰蛋白酶以提高病毒的感染和增殖效率。

 

另一方面,病毒的感染和增殖不僅是細胞代謝負荷不斷加大的過程,也是細胞病變、以致凋亡和壞死、甚至裂解的漸進性過程。Vero細胞無血清培養(yǎng)基的設(shè)計和優(yōu)化相對于應(yīng)用于動物細胞懸浮培養(yǎng)工藝生產(chǎn)重組蛋白、特別是治療性抗體生產(chǎn)的無血清培養(yǎng)基更具挑戰(zhàn)性。

 

設(shè)計Vero細胞無血清培養(yǎng)基的較為便捷和有效的策略是以DMEM,F(xiàn)-12, M199和RPMI1640等商品化的合成培養(yǎng)基的單獨使用或聯(lián)合使用為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,以反映細胞生長和代謝的主要參數(shù)為評價指標,結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法確定向其中添加生長因子、激素、結(jié)合蛋白及豁附因子、微量元素、脂類和脂類前體物等的種類和濃度。

 

締一生物為您推薦一款可用于Vero細胞無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,由HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE199-1和SFRE199-2,是培養(yǎng)基M199的改良款。其改變了M199培養(yǎng)基的部分營養(yǎng)成分配方,主要在增加了氨基酸和葡萄糖的濃度,并加入硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚精蛋白鋅胰島素。另外,還降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。SFRE 199-1有Hank's鹽;SFRE 199-2含有Earle's鹽,不含胰島素,可在使用前自行添加。

 

無血清培養(yǎng)基中常用的黏附因子主要是存在于細胞間質(zhì)和血清中的胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)蛋白,如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、玻連蛋白和膠原等。其中,纖粘連蛋白和層粘連蛋白不僅具有提高細胞的砧附力及活力的作用,同時在促進有絲分裂中也起著重要的作用。某些含有精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(RGD)序列的短膚也能夠有效地促進Vero細胞貼附到以聚苯乙烯和醋酸纖維素為材料的介質(zhì)表面。

 

Vero細胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)化主要涉及以下兩方面。其一,從提高病毒疫苗安全性的需要出發(fā),以非動物來源成分替代動物來源成分、化學(xué)組分明確成分替代化學(xué)組分不確定成分,其二,從提高病毒疫苗生產(chǎn)效率的目的考慮,根據(jù)細胞生長和代謝動力學(xué)特征優(yōu)化培養(yǎng)基的組成。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在細胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)及檢測領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。

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